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本试剂盒是利用phi29 DNA聚合酶在一定条件下（如不同的dNTP浓度、不同的Mg浓度和MnCl2存在时）能够按较高的机率引入随机引入突变。易错RCA弥补了易错PCR的巨大缺陷，其中一个缺陷是易错PCR没法使用短的DNA片段，因为PCR引物就占了40个bp左右，故不适合小片段DNA突变。但任何短链DNA经过环化后，均可进行易错RCA，故易错RCA可以对短的DNA片段进行突变。

• 即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。
  
• 配方经过精心优化，突变率稳定，一般能产生3～5个突变/kb。如果需要更高的突变率，只需把上一次易错RCA的产物用作下一次易错RCA的模板即可。也可以选购本公司的Bst聚合酶法易错RCA试剂盒。
  
• 靶分子DNA既可以是长度只有几十bp的小片段DNA，如启动子，适配子，酶活性区，核糖体结合区等，也可以是质粒、BAC、YAC或全基因组。只是短的DNA需要预先环化。
  
• 本试剂盒不含突变短的DNA所需要的环化试剂。
  
• 试剂含有荧光染料，可以实时检测反应情况，随时终止。也避免电泳，节约珍贵的扩增产物。
  
• RCA属于恒温扩增，只需要水浴或金属浴，不需要贵重的PCR仪器。

• 首次使用本试剂盒时，需要在装易错RCA引物干粉的黄盖管中加入55μL的自备超纯水，吹打混匀后短暂离心，放冰上待用。没有用完的引物需要放-20℃保存。
  
• 设置20μL体系的易错RCA反应。以下以一个样为例，每个样本最好设置两个浓度，每次实验设置一个无模板阴性对照：
  

  成分	浓度1	浓度2	阴性对照
  4×易错RCA预混液	5μL	5μL	5μL
  易错RCA引物	1μL	1μL	1μL
  易错RCA专用MnCl2	1μL	1μL	1μL
  环状DNA模板	1ng	50ng	不加
  自备超纯水	到19μL	至19μL	至19μL

• 95℃2分钟后，放室温自然冷却。
  
• 每管中加入0.5μL易错RCA专用DNA聚合酶。
  
• 30℃保温24小时，每10分钟设置为一个循环，在SYBR通道采集荧光信号。
  
• 实时检查易错RCA荧光信号，在两种情况下可以立即终止实验，不一定要等24小时结束。一是两个浓度模板中任何一个的荧光信号进入S型平台期，二是无模板阴性对照的荧光信号正好要爬升而样品的荧光信号已经爬升，此时可终止实验，将样本的扩增产物进行后续处理。
  
• 扩增结束后，对有扩增信号的样品，按常规操作进行DNA回收，再限制性内切酶酶切验证。如果得到预期大小的片段，则胶回收DNA，再进行克隆和测序等后续操作。
  
• 易错RCA的扩增产品可以用水稀释10倍后，再进行全基因组扩增，得到更多的DNA，然后再进行酶切，胶回收，克隆等后续操作。